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低速离心机在提取细胞质和细胞核蛋白中的应用
发布时间:2018-10-12   点击次数:60次

  蜀科低速离心机操作简单、运行平衡、性能稳定、安全可靠,入选“国产好仪器”,在临床医学,放射免疫、生物化学、食品卫生、环保等科研领域都有广泛应用。今天来介绍一下低速离心机在提取细胞质和细胞核蛋白中的应用。

  提取细胞质和细胞核蛋白的操作步骤如下:

  1、决定细胞生长状态,细胞生长状态应该是80%或者更好:
  2、用蜀科离心机以1500r/min离心5min
  3、弃上清液,用等体积的冷PBS洗细胞,像步骤2那样,反复3次
  4、根据估计的沉淀量加入5倍体积的isotonic lysis buffer到细胞颗粒中,使细胞温和悬浮,尽量避免泡沫
  5、加入裂解液lysis buffer在悬浮的细胞中,并放在冰上15min让细胞膨胀,可以通过显微镜检查
  6、对于细胞实验中膨胀的细胞,加入10%的IGEPAL CA-630使最后的浓度达到0、3%,混匀,加的时候要温和
  7、立即用蜀科
低速离心机离心(量大的可以用1、5ml的 EP管,以5500r/min离心30s;量大的可以用50ml的管子以5500r/min离心2min)
  8、转移上清液(细胞质蛋白)到一个新的冷冻管中
  9、用悬浮颗粒5倍体积的isotonic lysis buffer悬浮细胞,并混匀。
  10、用离心机离心细胞悬浮液,以1500r/min离心5min,移掉上清液
  11、用2/3倍体积的extraction buffer悬浮颗粒
  12、把管子放置在震荡混匀器上,以700r/min,15min震荡混匀,接着以1400r/min,15min,整个过程要仔细,避免泡沫产生
  13、以9400r/min离心15min,低温离心完后转移上清液到一个新的冷冻离心管中
  14、分成几份用液氮冷冻,并且保存起来(长期保存应放在-80℃上,短期保存要放在-20℃上)。
  蜀科仪器专注于离心机的研发、生产、销售,产品远销海内外,
低速离心机各项指标更是处于行业优势地位,还可提供定制服务。

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